《達文西密碼》提到主業會為了找尋聖杯而四處追殺人的情節，和現實生活當中的主業會不符。美國主業會要求，電影公司必須澄清電影情節是虛構。主業會人員芬那提説，我們要電影公司聲明，它並沒有真實呈現歷史原貌。主業會的成員表示，自己的工作是非常神聖的，「真正的主業會是一羣平凡人為了接近上帝而在生活中勵行修行。」
羅馬市中心海報要求被拆除
此外，意大利羅馬市中心一張《達文西密碼》的巨幅宣傳海報，也在教會人員的抗議下要求被拆除。這座歷史悠久的「聖潘塔裏奧」教堂隸屬內政部管理，最近在進行整修，而《達文西密碼》這幅巨大的廣告懸掛在整修工程鷹架上。羅馬教區禮儀主事怒斥片商，要求電影發行商尊重用作祈禱的地方，立即撤銷廣告。
羅馬教區高層表示，《達文西密碼》號稱揭開耶穌生子，後代繁衍至今之秘密，又指控教會隱瞞真相，説天主教會主持人類史上最大的遮羞案。教會高層表示，教堂是神聖之地，應受到尊重。
較早前在羅馬舉行耶穌受難節儀式時，有梵蒂岡講道師公開抨擊《達文西密碼》小説和電影版，也批評傳媒大肆報導的《猶大福音》。他指出，近年有很多人都出新理論，對流傳已久的聖經內容發出挑戰。有説耶穌沒有被釘十字架，也沒有死去；又有一種説法指耶穌其實是結過婚的。而本篤教宗16世則呼籲信徒，當面對世界邪惡勢力的攻擊時，不能再保持中立。
